CCK-8是一種廣泛應(yīng)用于細(xì)胞增殖和細(xì)胞毒性的細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)。CCK-8 溶液可以直接加入到細(xì)胞樣品中，不需要預(yù)配各種成分。細(xì)胞增殖越多越快，細(xì)胞顏色越深，證明毒性??；細(xì)胞毒性越大，則顏色越淺。對(duì)于同樣的細(xì)胞，顏色的深淺 (生成的 formazan 量) 和細(xì)胞數(shù)，目呈線性關(guān)系。

細(xì)胞，96孔細(xì)胞培養(yǎng)板、CO2培養(yǎng)箱、超凈工作臺(tái)、微量移液器、酶標(biāo)儀、CCK-8試劑盒等。

4. 測(cè)定吸光度。建議采用雙波長進(jìn)行測(cè)定，檢測(cè)波長430-490nm，參比波長600-650nm，或者采用450nm單波長檢測(cè)。

計(jì)算公式細(xì)胞存活率=[(As-Ab) / (Ac-Ab)] × 100%抑制率=[(Ac-As) / (Ac-Ab)] × 100%As: 實(shí)驗(yàn)孔吸光度 (含細(xì)胞、培養(yǎng)基、CCK-8 溶液和藥物溶液) ；Ac: 對(duì)照孔吸光度 (含細(xì)胞、培養(yǎng)基、CCK-8 溶液，不含藥物) ；Ab: 空白孔吸光度 (含培養(yǎng)基、CCK-8 溶液，不含細(xì)胞、藥物) 

1. 如果細(xì)胞起始的培養(yǎng)體積為200ul，則需加入20ul的CCK-8溶液，以此類推。

2. 建議每個(gè)藥物濃度孔設(shè)置3個(gè)復(fù)孔，最后取均值做曲線。

3. 設(shè)計(jì)好實(shí)驗(yàn)對(duì)照，盡量排除其它因素的干擾：1）空白對(duì)照：可以用加了等量細(xì)胞培養(yǎng)液、CCK-8溶液和藥物但沒有加細(xì)胞的孔；2）陰性對(duì)照：不加藥物但加了藥物溶劑的細(xì)胞孔。

4. 試劑盒的檢測(cè)依賴于脫氫酶催化的反應(yīng)，如果待測(cè)物質(zhì)有氧化性或還原性，可能會(huì)干擾檢測(cè)，需設(shè)法去除（加入CCK-8溶液之前更換新鮮培養(yǎng)基，去掉藥物影響。如果藥物影響比較小的情況下，可以不更換培養(yǎng)基，直接扣除培養(yǎng)基中加入藥物后的空白吸收即可）。

5. 加入CCK-8溶液后注意孵育時(shí)間，孵育時(shí)間的長短根據(jù)細(xì)胞的類型和細(xì)胞的密度等實(shí)驗(yàn)情況而定，初次實(shí)驗(yàn)時(shí)可以在0.5、1、2和4小時(shí)后分別用酶標(biāo)儀檢測(cè)，然后選取吸光度范圍比較適宜的一個(gè)時(shí)間點(diǎn)用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

6. 細(xì)胞在培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)時(shí)，培養(yǎng)板最外邊的孔容易干燥揮發(fā)，由于體積不準(zhǔn)確而增加誤差。一般情況下，最外一圈的孔只加培養(yǎng)基，不作測(cè)定孔用。

7. 若暫時(shí)不測(cè)定OD值，可以向每孔中加入10ul 10% SDS溶液終止反應(yīng)，并遮蓋培養(yǎng)板避光保存在室溫條件下。24小時(shí)內(nèi)測(cè)定，吸光度不會(huì)變化太大，一般還是建議立刻檢測(cè)。

8. 用酶標(biāo)儀檢測(cè)前需確保每個(gè)孔內(nèi)沒有氣泡，否則會(huì)干擾測(cè)定。

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